GnRHR Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401783-LAC

Il gene umano **GNRHR** codifica il recettore dell’ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRHR), un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) di classe A che trasduce i segnali ipotalamici di GnRH nelle cellule gonadotrope dell’ipofisi per regolare la sintesi e la secrezione dell’ormone luteinizzante e dell’ormone follicolo-stimolante. In seguito al legame con il ligando, GnRHR si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare PLCβ, generando IP3 e DAG, aumentando il Ca2+ intracellulare e attivando una segnalazione dipendente da PKC con modulazione a valle della via MAPK/ERK. Questo asse di segnalazione coordina la tempistica endocrina riproduttiva, i circuiti di feedback della steroidogenesi e lo sviluppo gonadico attraverso programmi trascrizionali strettamente controllati. Un’alterata espressione o segnalazione di GNRHR è stata implicata in disturbi endocrini riproduttivi, tra cui l’ipogonadismo ipogonadotropo e modifiche della tempistica puberale, e rappresenta un punto di accesso meccanicistico per studiare la regolazione degli ormoni ipofisari.

Le particelle di attivazione lentivirale GnRHR (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GNRHR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GnRHR (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GNRHR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GnRHR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GNRHR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.