GM130 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400787-LAC

GOLGA2 codifica la proteina della matrice del cis-Golgi GM130, un fattore di ancoraggio periferico di membrana che contribuisce a organizzare l’architettura del nastro del Golgi e a mantenere le cisterne impilate. GM130 coordina la cattura e la fusione delle vescicole tramite interazioni con p115/USO1 e altre golgine, supporta il traffico dipendente da COPI/COPII e contribuisce al posizionamento del centrosoma, all’organizzazione dei microtubuli e alla polarità cellulare. Attraverso i suoi ruoli nel flusso della via secretoria e nell’integrità del Golgi, una funzione alterata di GM130 è rilevante per le risposte cellulari allo stress, la migrazione e i fenotipi osservati in modelli di malattie proliferative e neurodegenerative, in cui frammentazione del Golgi e squilibrio del traffico sono comuni. Questi processi rendono GOLGA2 un nodo utile per studiare il traffico di membrana, la biogenesi degli organelli e la segnalazione collegata alla proteostasi e al controllo del ciclo cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale GM130 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GOLGA2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GM130 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GOLGA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GM130. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GOLGA2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.