Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GlyRS Plasmide Double Nickase (h): sc-404105-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GlyRS Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GlyRS Double Nickase Plasmid (h) e il GlyRS Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GARS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GlyRS Antibody (D-10): sc-365311
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GlyRS Plasmide Double Nickase (h) | sc-404105-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GlyRS Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404105-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GARS codifica la glicil-tRNA sintetasi umana (GlyRS), una aminoacil-tRNA sintetasi citosolica che carica il tRNA^Gly con glicina, fornendo i tRNA aminoacilati necessari per la traduzione ribosomiale. Mantenendo la fedeltà della traduzione e la proteostasi, la GlyRS sostiene processi fondamentali, tra cui la sintesi proteica, le risposte allo stress e gli stati cellulari ad alto dispendio energetico in cui è richiesto un elevato flusso traduttivo. La disregolazione o le mutazioni di GARS sono state collegate a fenotipi di neuropatia periferica, evidenziando la sensibilità dei sistemi neuronali e assonali alle alterazioni della carica dei tRNA e dell’omeostasi proteica. In quanto enzima “housekeeping” conservato, ma con vulnerabilità specifiche di tessuto, la GlyRS è spesso studiata in modelli di neurodegenerazione, stress proteotossico e segnalazione dipendente dalla traduzione.
GlyRS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GARS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GARS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GARS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GARS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.