Glutathione reductase Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417499-LAC

GSR codifica la glutatione reduttasi umana, una flavoproteina dipendente da NADPH che mantiene l’equilibrio redox cellulare riducendo il glutatione ossidato (GSSG) a glutatione ridotto (GSH). Mantenendo il pool di GSH, GSR sostiene le difese antiossidanti, la detossificazione delle specie reattive dell’ossigeno e il metabolismo dipendente dal glutatione nel citosol e nei mitocondri. Questa attività si integra con vie che generano NADPH, come la via dei pentoso fosfati, e contribuisce al controllo redox dei tioli proteici e della segnalazione. Alterazioni della funzione o dell’espressione di GSR sono state associate a fenotipi di stress ossidativo e sono spesso investigate in contesti quali la suscettibilità all’emolisi, la neurodegenerazione, la disfunzione metabolica e l’adattamento redox correlato al cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale Glutathione reductase (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GSR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Glutathione reductase (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GSR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Glutathione reductase. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GSR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.