GLUD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402187

Panoramica

GLUD1 codifica la glutammato deidrogenasi mitocondriale 1 (GDH1), un enzima NAD(P)+-dipendente che catalizza la deaminazione ossidativa reversibile del glutammato ad α-chetoglutarato e ammoniaca, collegando il metabolismo degli amminoacidi al ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA) e all’equilibrio redox cellulare. Controllando il flusso tra glutaminolisi e metabolismo ossidativo, GLUD1 influenza la bioenergetica mitocondriale, la gestione dell’azoto e il rifornimento anaplerotico del metabolismo centrale del carbonio. Un’alterata attività di GDH1 è stata associata a una disregolazione metabolica che riguarda la secrezione di insulina e l’omeostasi dei neurotrasmettitori eccitatori, rendendo GLUD1 un bersaglio rilevante negli studi sul metabolismo mitocondriale e sulla segnalazione neuroendocrina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GLUD1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GLUD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GLUD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GLUD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GLUD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GLUD1 per lo studio della segnalazione di GLUD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GLUD1 critici per la funzione di GLUD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GLUD1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GLUD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GLUD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GLUD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GLUD1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GLUD1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GLUD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GLUD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.