girdin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430846

Panoramica

Il gene murino **Ccdc88a** codifica **girdin** (nota anche come **GIV**), una grande proteina citoplasmatica di impalcatura (scaffold) che integra segnali provenienti dalle proteine G eterotrimeriche e dalle tirosin-chinasi recettoriali per coordinare il rimodellamento dell’actina, la polarità cellulare e la migrazione direzionale. Girdin si localizza al bordo di avanzamento e si associa a regolatori del citoscheletro, influenzando processi quali la formazione di lamellipodi, il traffico vescicolare e l’organizzazione epiteliale. È stata collegata alle dinamiche di segnalazione PI3K–AKT e al controllo dei programmi di crescita e sopravvivenza cellulare, risultando quindi rilevante per studi di morfogenesi tissutale e motilità cellulare patologica. Alterazioni delle vie associate a girdin sono state riportate in diversi contesti di malattia in cui cambiamenti di adesione e migrazione contribuiscono alla progressione, a sostegno di indagini meccanicistiche in sistemi modello murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO girdin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccdc88a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccdc88a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccdc88a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina girdin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccdc88a per lo studio della segnalazione di girdin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccdc88a critici per la funzione di girdin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccdc88a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal girdin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal girdin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccdc88a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal girdin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR girdin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccdc88a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccdc88a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.