GCP-2 Plasmide Double Nickase (m): sc-422852-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GCP-2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GCP-2 Double Nickase Plasmid (m) e il GCP-2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cxcl5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GCP-2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422852-NIC | 20 µg | $410.00 |
Cxcl5 codifica la granulocyte chemotactic protein-2 (GCP-2), una chemiochina CXC ELR+ secreta che coordina il reclutamento dell’immunità innata promuovendo la chemiotassi e l’attivazione dei neutrofili tramite la segnalazione di CXCR2. Nei tessuti murini, GCP-2 contribuisce al traffico delle cellule infiammatorie, alla comunicazione epitelio–stroma e alle risposte angiogeniche, integrandosi con reti di citochine regolate da NF-κB e con gradienti di chemiochine che modellano l’extravasazione dei leucociti. L’alterazione dell’espressione di Cxcl5 è comunemente associata a microambienti infiammatori deregolati, a modifiche del danno tissutale mediato dai neutrofili e al rimodellamento del microambiente osservato in modelli di infezione, infiammazione cronica e infiammazione associata ai tumori. In quanto nodo nelle vie di segnalazione delle chemiochine, Cxcl5 è spesso studiato per il suo ruolo nel reclutamento mieloide, nel crosstalk tra citochine e negli effetti sui tessuti barriera, come l’epitelio polmonare e quello gastrointestinale.
GCP-2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cxcl5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cxcl5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cxcl5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cxcl5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.