GCDH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405887

Panoramica

Il gene umano **GCDH** codifica la glutaryl‑CoA deidrogenasi, una flavoproteina mitocondriale che catalizza la decarbossilazione ossidativa del glutaryl‑CoA a crotonyl‑CoA durante il catabolismo di lisina, idrossilisina e triptofano. Questa reazione collega la degradazione degli amminoacidi al metabolismo energetico mitocondriale e all’omeostasi redox tramite un trasferimento di elettroni dipendente da FAD. L’attività di GCDH influenza l’equilibrio degli acil‑CoA e degli acidi organici, modulando le risposte mitocondriali allo stress e il rimodellamento metabolico in condizioni di variazioni della disponibilità di nutrienti. Le varianti con perdita di funzione sono associate all’acidemia glutarica di tipo I, e GCDH è spesso studiato nel contesto della vulnerabilità neurometabolica, della disfunzione mitocondriale e dell’accumulo di acidi organici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GCDH (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GCDH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GCDH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GCDH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GCDH.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GCDH per lo studio della segnalazione di GCDH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GCDH critici per la funzione di GCDH
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GCDH per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GCDH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GCDH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GCDH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GCDH Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GCDH (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GCDH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GCDH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.