gasdermin Plasmide Double Nickase (h): sc-410658-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- gasdermin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il gasdermin Double Nickase Plasmid (h) e il gasdermin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GSDMA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: gasdermin Antibody (H-6): sc-376318
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
gasdermin Plasmide Double Nickase (h) | sc-410658-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
gasdermin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410658-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il GSDMA umano codifica la gasdermina A, un membro della famiglia delle gasdermine implicato nell’omeostasi epiteliale e in vie di morte cellulare regolata legate alla permeabilizzazione della membrana. Le gasdermine sono note soprattutto come effettori a valle della segnalazione associata all’inflammasoma e della piroptosi, modulando il rilascio di citochine e le risposte infiammatorie di barriera. L’espressione di GSDMA è arricchita negli epiteli stratificati ed è stata associata a programmi genetici e trascrizionali rilevanti per l’asma, fenotipi cutanei infiammatori e altri disturbi immunomediati. In ambito di ricerca, la perturbazione di GSDMA supporta studi meccanicistici su vie collegate all’inflammasoma, sulla differenziazione epiteliale e su fenotipi di morte cellulare indotti da stress.
gasdermin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GSDMA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GSDMA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GSDMA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GSDMA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.