GAP1^m Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431130

Panoramica

Rasa2 codifica la proteina attivatrice della GTPasi Ras GAP1m, un regolatore negativo della segnalazione di Ras che accelera l’idrolisi del GTP per limitare l’output delle vie MAPK/ERK e PI3K/AKT. Modulando ampiezza e durata dell’attività di Ras, GAP1m influenza la progressione del ciclo cellulare, i segnali di differenziamento e le dinamiche del citoscheletro che determinano migrazione e adesione. Nei modelli murini, un’alterata funzione di Rasa2 è stata associata a una segnalazione dei fattori di crescita deregolata e a fenotipi immunitari e dello sviluppo anomali, rendendolo rilevante per lo studio del rimodellamento delle reti guidato da Ras in contesti pertinenti alla malattia. La sua posizione come “freno” della segnalazione supporta indagini meccanicistiche su feedback di via, integrazione dei segnali e ingaggio degli effettori di Ras dipendente dal contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GAP1m (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rasa2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rasa2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rasa2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GAP1m.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rasa2 per lo studio della segnalazione di GAP1m, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rasa2 critici per la funzione di GAP1m
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rasa2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GAP1m CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GAP1m CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rasa2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GAP1m Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GAP1m (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rasa2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rasa2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.