galectin-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-421417-KO-2

Panoramica

Lgals4 codifica la lectina legante i β-galattosidi galectina-4, una galectina a ripetizioni in tandem arricchita nell’epitelio intestinale, che si associa a proteine di membrana e glicolipidi glicosilati per organizzare microdomini apicali e regolare le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice. La galectina-4 contribuisce alla differenziazione epiteliale, al mantenimento della barriera e al traffico delle glicoproteine, e può modulare la segnalazione e la comunicazione immunitaria attraverso un legame carboidrato-dipendente sulla superficie cellulare. Nei tessuti murini, un’alterata espressione di Lgals4 è stata associata a cambiamenti nell’infiammazione mucosale e nell’omeostasi epiteliale, rendendola rilevante per studi di fisiologia intestinale e del rimodellamento associato all’infiammazione. La sua attività lectinica supporta inoltre l’indagine di vie dipendenti dalla glicosilazione che influenzano adesione, migrazione e risposte dell’epitelio allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-4 (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lgals4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lgals4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lgals4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina galectin-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lgals4 per lo studio della segnalazione di galectin-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lgals4 critici per la funzione di galectin-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lgals4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal galectin-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal galectin-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lgals4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal galectin-4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR galectin-4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lgals4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lgals4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.