galectin-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404255

Panoramica

LGALS4 codifica la galectina-4, una lectina legante i β-galattosidi arricchita negli epiteli gastrointestinali, che contribuisce all’organizzazione della membrana apicale e all’omeostasi della barriera mucosale. La galectina-4 interagisce con recettori glicosilati e componenti della matrice extracellulare per regolare l’adesione cellula–cellula e cellula–matrice, la polarità epiteliale e la differenziazione. Attraverso interazioni dipendenti dai glicani, può influenzare nodi di segnalazione legati all’infiammazione e al rimodellamento epiteliale, incluse vie che coordinano la dinamica dell’adesione e le risposte citochiniche. Un’espressione disregolata di LGALS4 è stata associata a stati infiammatori intestinali e a neoplasie epiteliali, a supporto del suo impiego come marcatore funzionale negli studi sulla compromissione della barriera e sulla biologia tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LGALS4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LGALS4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LGALS4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina galectin-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LGALS4 per lo studio della segnalazione di galectin-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LGALS4 critici per la funzione di galectin-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LGALS4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal galectin-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal galectin-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LGALS4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal galectin-4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR galectin-4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LGALS4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LGALS4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.