GABP-β1/2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404040-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GABP-β1/2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GABP-β1/2 Double Nickase Plasmid (h) e il GABP-β1/2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GABPB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GABP-β1/2 Antibody (E-7): sc-271571
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GABP-β1/2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GABP-β1/2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La subunità beta 1 della proteina legante GA (GA-binding protein subunit beta 1, GABPB1) codifica il partner β1/β2 che forma un eterodimero con GABPA per costituire il fattore di trascrizione GABP della famiglia ETS, il quale si lega a elementi promotori ricchi in GA e coordina programmi di espressione genica che controllano la progressione del ciclo cellulare, la biogenesi mitocondriale e la proteostasi. I complessi GABP regolano geni mitocondriali codificati dal nucleo e la capacità di fosforilazione ossidativa, e contribuiscono anche al controllo trascrizionale del mantenimento dei telomeri attraverso la regolazione del promotore di TERT. Attraverso queste funzioni, GABPB1 si inserisce in vie che governano il metabolismo cellulare, l’adattamento allo stress e reti trascrizionali specifiche di linea cellulare. La disregolazione della segnalazione di GABP e un’alterata produzione trascrizionale dipendente da GABPB1 sono state implicate in contesti di biologia tumorale e in disturbi con difetti mitocondriali o del controllo trascrizionale, a sostegno di studi meccanicistici sulla regolazione genica e sulla fitness cellulare.
GABP-β1/2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GABPB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GABPB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GABPB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GABPB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.