G6Pase-β Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403320-ACT

G6PC3 codifica la glucosio-6-fosfatasi beta (G6Pasi-β), una subunità catalitica residente nel reticolo endoplasmatico che idrolizza il glucosio-6-fosfato in glucosio e fosfato inorganico all’interno del sistema della glucosio-6-fosfatasi. Questa attività contribuisce alla gestione intracellulare del glucosio e si integra con il metabolismo centrale dei carboidrati e con l’omeostasi associata al RE, influenzando il bilancio energetico e lo stato redox in molteplici tipi cellulari. La funzione di G6PC3 è stata collegata alla regolazione della fisiologia delle cellule mieloidi e delle risposte allo stress, e varianti di questo gene sono associate a fenotipi di neutropenia congenita. Di conseguenza, G6PC3 è spesso studiato in modelli di sviluppo delle cellule immunitarie, rimodellamento metabolico e processi di segnalazione dipendenti dal RE.

G6Pase-β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di G6PC3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

G6Pase-β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus G6PC3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione G6PC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di G6Pase-β. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus G6PC3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da G6Pase-β nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via G6Pase-β nelle cellule tumorali con espressione di G6PC3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.