Furin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400904-LAC

FURIN codifica per la furina, una proprotein convertasi calcio-dipendente che ricircola attraverso la rete trans-Golgi e i compartimenti endosomiali per attivare proteoliticamente diversi precursori proteici che presentano motivi basici appaiati. Regolando la maturazione di fattori di crescita, recettori, molecole di adesione e proteasi, la furina contribuisce all’omeostasi delle proteine secretorie e di membrana e influenza vie associate al rimodellamento della matrice extracellulare, alla segnalazione immunitaria e alla differenziazione cellulare. Un’attività di FURIN deregolata è stata associata ad alterazioni della proteostasi e a un processamento anomalo di componenti della segnalazione in contesti quali la biologia del cancro, l’infiammazione e la ricerca sulle malattie infettive. In quanto nodo centrale del processamento delle proproteine, FURIN offre un punto di ingresso meccanicistico per studiare come la scissione dei precursori controlli la composizione della superficie cellulare e gli output di segnalazione a valle.

Le particelle di attivazione lentivirale Furin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FURIN in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Furin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FURIN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Furin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FURIN e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.