FRP-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422899

Panoramica

Sfrp4 codifica la proteina secreta frizzled-related 4 (FRP-4), un modulatore solubile della segnalazione Wnt che lega i ligandi Wnt e/o i recettori Frizzled per regolare finemente l’output delle vie dipendenti da β-catenina e delle vie non canoniche. Nei tessuti murini, FRP-4 contribuisce alla regolazione delle decisioni sul destino cellulare, della proliferazione, del rimodellamento della matrice extracellulare e dei programmi di differenziamento importanti per la definizione dei pattern di sviluppo e per l’omeostasi tissutale. Un’espressione alterata di Sfrp4 è stata associata a un’attività deregolata della via Wnt in contesti quali fibrosi, rimodellamento metabolico dei tessuti e biologia tumorale, in cui variazioni del “tono” Wnt possono influenzare le interazioni epitelio-mesenchimali e le risposte stromali. In quanto regolatore di via secretato, Sfrp4 è spesso studiato nelle reti di cross-talk della segnalazione che integrano Wnt con TGF-β, segnali infiammatori e programmi trascrizionali che specificano la linea cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FRP-4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sfrp4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sfrp4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sfrp4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FRP-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sfrp4 per lo studio della segnalazione di FRP-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sfrp4 critici per la funzione di FRP-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sfrp4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FRP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FRP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sfrp4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FRP-4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FRP-4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sfrp4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sfrp4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.