FRP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422897

Panoramica

Sfrp1 codifica la secreted frizzled-related protein 1 (FRP-1), un modulatore secreto della segnalazione Wnt che si lega ai ligandi Wnt e ai recettori Frizzled per modellare l’intensità della via e i gradienti spaziali. Regolando finemente la trascrizione canonica dipendente da β-catenina e gli output Wnt non canonici, FRP-1 influenza proliferazione, differenziamento e migrazione cellulari, nonché il rimodellamento della matrice extracellulare durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. In modelli murini e in studi meccanicistici, alterazioni dell’attività di Sfrp1 sono state collegate a stati deregolati della via Wnt, rilevanti per la fibrosi, per fenotipi metabolici e scheletrici e per contesti di segnalazione associati ai tumori. Poiché Sfrp1 agisce all’interfaccia extracellulare, viene spesso utilizzato per distinguere il controllo autocrino da quello paracrino dei programmi guidati da Wnt.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FRP-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sfrp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sfrp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sfrp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FRP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sfrp1 per lo studio della segnalazione di FRP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sfrp1 critici per la funzione di FRP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sfrp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FRP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FRP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sfrp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FRP-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FRP-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sfrp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sfrp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.