FOXQ1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403650-ACT

Il gene umano **FOXQ1** codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box che regola la differenziazione epiteliale, la specificazione del destino cellulare e i programmi trascrizionali che controllano proliferazione e motilità. L’attività di FOXQ1 si integra con reti di segnalazione epigenetiche e dello sviluppo, comprese vie associate alla transizione epitelio–mesenchimale (EMT) e all’espressione genica legata a Wnt/β-catenina, modellando i fenotipi di adesione cellula–cellula e di migrazione. Un’espressione deregolata di FOXQ1 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso studiata per la sua associazione con l’invasione, firme trascrizionali correlate alla metastasi e un’omeostasi epiteliale alterata. In quanto proteina nucleare legante il DNA, FOXQ1 è anche utilizzato come marcatore e nodo meccanicistico in modelli di riprogrammazione trascrizionale e plasticità di linea.

FOXQ1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FOXQ1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXQ1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FOXQ1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FOXQ1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXQ1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FOXQ1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXQ1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXQ1 nelle cellule tumorali con espressione di FOXQ1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.