FNIP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409140

Panoramica

FNIP2 (folliculin interacting protein 2) è un partner di legame citoplasmatico del soppressore tumorale FLCN e svolge un ruolo nella segnalazione del sensing dei nutrienti e dell’omeostasi energetica. Contribuisce alla regolazione dell’asse AMPK–mTOR e partecipa a processi associati ai lisosomi che collegano la disponibilità di amminoacidi all’adattamento metabolico, con effetti a valle su autofagia e controllo della crescita cellulare. Attraverso le sue interazioni con FLCN e complessi correlati, FNIP2 influenza la funzione mitocondriale e le risposte allo stress nei tessuti metabolicamente attivi. La disregolazione della segnalazione FLCN–FNIP è stata collegata a vie implicate nella predisposizione tumorale ereditaria e in meccanismi più ampi di malattie metaboliche, a sostegno della sua rilevanza negli studi sulla crescita cellulare e sull’omeostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FNIP2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FNIP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FNIP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FNIP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FNIP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FNIP2 per lo studio della segnalazione di FNIP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FNIP2 critici per la funzione di FNIP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FNIP2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FNIP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FNIP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FNIP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FNIP2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FNIP2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FNIP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FNIP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.