FKSG80 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433960

Panoramica

Hcar1 codifica un recettore accoppiato a proteine G sensibile al lattato, implicato nel collegare la disponibilità di lattato extracellulare a programmi di segnalazione intracellulare che regolano il metabolismo cellulare e la modulazione immunitaria nei tessuti murini. L’attivazione del recettore è associata alla soppressione del cAMP dipendente da Gi/o e a effetti a valle sulla segnalazione MAPK, sulle risposte trascrizionali e sul rimodellamento metabolico durante l’ipossia o in condizioni di elevato flusso glicolitico. Grazie al suo ruolo nella segnalazione del lattato, Hcar1 viene studiato in contesti di infiammazione, neurobiologia, fisiologia del tessuto adiposo e muscolare e microambienti associati ai tumori, in cui i gradienti di lattato plasmano il comportamento cellulare. La deregolazione della segnalazione del recettore del lattato è quindi rilevante per le vie che coordinano l’omeostasi energetica e l’adattamento allo stress in molteplici sistemi d’organo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FKSG80 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hcar1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hcar1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hcar1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FKSG80.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hcar1 per lo studio della segnalazione di FKSG80, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hcar1 critici per la funzione di FKSG80
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hcar1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FKSG80 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FKSG80 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hcar1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FKSG80 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FKSG80 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hcar1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hcar1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.