FKBPL Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410504-LAC

Il gene umano FKBPL codifica la FK506-binding protein-like (FKBPL), un’immunofillina atipica che funge da co-chaperone di HSP90 e da regolatore di scaffolding di proteine di segnalazione coinvolte nella proteostasi, nel controllo del ciclo cellulare e nelle risposte allo stress. Attraverso meccanismi dipendenti dalle chaperoni, FKBPL influenza il ripiegamento e la stabilità delle proteine ed è stata collegata alla regolazione della segnalazione dei recettori steroidei e di vie associate a risposte infiammatorie mediate da NF-κB. Un’alterata espressione di FKBPL è stata riportata in molteplici contesti patologici, inclusi fenotipi associati al cancro come proliferazione, risposte al danno del DNA e programmi legati all’angiogenesi, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per l’interrogazione delle vie di segnalazione. Queste caratteristiche rendono FKBPL un bersaglio rilevante per analizzare reti di chaperoni, regolazione trascrizionale e segnalazione da stress dipendente dal contesto in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale FKBPL (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FKBPL in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FKBPL (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FKBPL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FKBPL. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FKBPL e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.