FKBP25 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410783-ACT

FKBP3 umano codifica FKBP25, un immunofilina nucleare legante FK506 con attività isomerasi peptidil-prolil cis–trans, che supporta il ripiegamento proteico e la regolazione conformazionale dei complessi nucleari. FKBP25 interagisce con fattori associati alla cromatina e contribuisce al controllo trascrizionale, alla risposta al danno al DNA e a processi nucleari legati al ciclo cellulare, inclusa la modulazione della segnalazione dipendente da p53. Per questi ruoli, FKBP3 viene studiato in relazione alla stabilità del genoma, alla regolazione epigenetica e ai programmi trascrizionali di adattamento allo stress. Alterazioni dell’attività e dell’espressione di FKBP3/FKBP25 sono state investigate nella biologia di patologie proliferative e associate all’infiammazione come correlati di una deregolazione della segnalazione nucleare e della funzione della cromatina.

FKBP25 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FKBP3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FKBP25 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FKBP3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FKBP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FKBP25. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FKBP3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FKBP25 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FKBP25 nelle cellule tumorali con espressione di FKBP3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.