FKBP11 Plasmide Double Nickase (h): sc-405563-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FKBP11 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FKBP11 Double Nickase Plasmid (h) e il FKBP11 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FKBP11. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FKBP11 Antibody (D-3): sc-398700
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FKBP11 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405563-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FKBP11 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405563-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FKBP11 codifica un membro della famiglia delle proteine leganti FK506 localizzato nel reticolo endoplasmatico, con attività di isomerasi peptidil-prolil cis–trans, che supporta il ripiegamento proteico e il controllo qualità nella via secretoria. È arricchito nelle cellule secernenti anticorpi e in altri stati cellulari altamente secretori, dove contribuisce alla proteostasi del RE, al ripiegamento dei polipeptidi neo-sintetizzati e al coordinamento della segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR). Attraverso queste funzioni, FKBP11 è associato all’adattamento cellulare allo stress del RE e alla regolazione della maturazione e del traffico delle proteine. La disregolazione dell’omeostasi del RE che coinvolge FKBP11 è stata studiata in contesti di infiammazione cronica, differenziamento delle cellule immunitarie e patobiologia associata allo stress, in cui il carico secretorio e la capacità di proteostasi risultano alterati.
FKBP11 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FKBP11 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FKBP11. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FKBP11. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FKBP11 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.