FKBP10 Plasmide Double Nickase (m): sc-420366-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FKBP10 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FKBP10 Double Nickase Plasmid (m) e il FKBP10 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Fkbp10. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FKBP10 Antibody (D-4): sc-390538
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FKBP10 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420366-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FKBP10 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420366-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Fkbp10 codifica FKBP10, una peptidil‑prolil cis–trans isomerasi legante FK506 residente nel reticolo endoplasmatico, che funge da chaperone specifico per il collagene durante il ripiegamento e la maturazione del procollagene. FKBP10 sostiene l’assemblaggio della matrice extracellulare coordinando la stabilizzazione della tripla elica del collagene e facilitandone la corretta secrezione, integrandosi nelle reti di proteostasi del RE che includono il ripiegamento assistito da chaperoni e il controllo qualità. Nei tessuti murini ricchi di matrice connettivale, l’attività di FKBP10 influenza la biosintesi del collagene, l’organizzazione delle fibrille e, a valle, le proprietà meccaniche dei tessuti. La disregolazione dell’elaborazione del collagene dipendente da FKBP10 è associata a fenotipi ereditari del tessuto connettivo e dello scheletro, rendendo Fkbp10 un bersaglio rilevante per lo studio dei meccanismi patologici guidati dalla matrice.
FKBP10 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Fkbp10 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Fkbp10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Fkbp10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Fkbp10 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.