FKBP10 Double Nickaseプラスミド (m): sc-420366-NIC

Fkbp10はFKBP10をコードしている。FKBP10は小胞体（ER）に局在するFK506結合性のペプチジル‐プロリルcis–trans異性化酵素であり、プロコラーゲンの折り畳みと成熟過程においてコラーゲン特異的シャペロンとして機能する。FKBP10は、コラーゲン三重らせんの安定化を調整し適切な分泌を促進することで細胞外マトリックスの構築を支え、シャペロン介在性の折り畳みや品質管理を含むERプロテオスタシスネットワークに組み込まれている。結合組織性マトリックスに富むマウス組織では、FKBP10の活性がコラーゲン生合成、線維の組織化、ならびにそれに続く組織力学特性に影響を与える。FKBP10依存的なコラーゲン処理の破綻は、遺伝性の結合組織および骨格の表現型と関連しており、Fkbp10はマトリックス駆動性の病態メカニズムを研究する上で重要な標的となる。

FKBP10 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Fkbp10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Fkbp10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Fkbp10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Fkbp10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。