FKBP10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405062-ACT

FKBP10 codifica la FK506-binding protein 10 (FKBP65), un’isomerasi peptidil-prolil cis-trans residente nel reticolo endoplasmatico che funge da chaperone molecolare durante la biosintesi del collagene. Favorisce il corretto ripiegamento, l’assemblaggio e la maturazione del procollagene, influenzando l’organizzazione della matrice extracellulare e l’omeostasi dei tessuti connettivi. L’attività di FKBP10 si interseca con il controllo di qualità delle proteine nel RE e con le vie di proteostasi che regolano la secrezione di matrici ricche di collagene. L’alterazione genetica o la disregolazione di FKBP10 è associata a fenotipi ereditari del tessuto connettivo e dello scheletro, rendendolo un bersaglio utile per studiare l’elaborazione del collagene, la segnalazione guidata dalla matrice e le interazioni cellula–matrice in modelli umani.

FKBP10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FKBP10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FKBP10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FKBP10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FKBP10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FKBP10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FKBP10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FKBP10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FKBP10 nelle cellule tumorali con espressione di FKBP10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.