Fis1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-426020-LAC

Il gene murino Fis1 (fission 1) codifica una proteina della membrana mitocondriale esterna che contribuisce a coordinare la fissione mitocondriale interagendo con il macchinario DRP1 e organizzando i siti di scissione, influenzando così la morfologia e la distribuzione dei mitocondri. Attraverso i suoi effetti sulla dinamica mitocondriale, Fis1 modula la mitofagia, l’efficienza della fosforilazione ossidativa, l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno e la segnalazione apoptotica. L’alterazione dell’equilibrio fissione–fusione regolato da Fis1 è stata associata a fenotipi di stress mitocondriale rilevanti per neurodegenerazione, disfunzione cardiometabolica e segnalazione infiammatoria in diversi sistemi modello. Di conseguenza, Fis1 è spesso utilizzato per studiare le vie di controllo qualità mitocondriale e la regolazione, dipendente dagli organelli, del metabolismo e della sopravvivenza cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale Fis1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Fis1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Fis1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Fis1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Fis1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Fis1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.