FGF-7 Plasmide Double Nickase (h): sc-401243-NIC

FGF7 codifica il fattore di crescita dei fibroblasti 7 (FGF-7, fattore di crescita dei cheratinociti), un ligando paracrino che segnala principalmente attraverso FGFR2b per regolare la proliferazione, la sopravvivenza, la migrazione e la differenziazione delle cellule epiteliali. L’attività di FGF-7 coinvolge le vie canoniche dei recettori tirosin-chinasici, tra cui RAS–MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ/PKC, modellando i programmi di riparazione tissutale e la comunicazione epitelio–mesenchimale. Una deregolazione della segnalazione FGF7–FGFR2b è stata implicata in un rimodellamento epiteliale anomalo e in microambienti infiammatori, ed è spesso studiata nel contesto del controllo oncogenico della crescita epiteliale e del crosstalk tra stroma e tumore. In vitro, la perturbazione di FGF7 viene utilizzata per indagare la funzione di barriera, le risposte di cicatrizzazione delle ferite e la dipendenza dai fattori di crescita nelle diverse linee cellulari epiteliali.

FGF-7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FGF7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FGF7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FGF7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FGF7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.