FCRLM1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417336-ACT

FCRLA codifica per Fc receptor–like A, una proteina intracellulare della famiglia dei recettori Fc, espressa prevalentemente nelle cellule della linea B e associata al reticolo endoplasmatico e a compartimenti contenenti immunoglobuline. È implicata nella differenziazione delle cellule B e nell’omeostasi immunitaria, influenzando l’assemblaggio/trasporto delle immunoglobuline e le reti di segnalazione che modellano le risposte dipendenti dall’antigene. Pattern di espressione alterati dei geni Fc receptor–like, incluso FCRLA, sono stati riportati in diverse neoplasie delle cellule B e in stati immunitari associati all’autoimmunità, a supporto del suo valore come marcatore e come nodo meccanicistico nella biologia delle cellule B. Lo studio della regolazione di FCRLA aiuta a definire le vie che controllano l’attivazione delle cellule B, la produzione di anticorpi e le risposte allo stress legate a una immunità umorale disfunzionale.

FCRLM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FCRLA senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FCRLM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FCRLA nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FCRLA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FCRLM1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FCRLA nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FCRLM1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FCRLM1 nelle cellule tumorali con espressione di FCRLA silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.