FBL10 Plasmide Double Nickase (h): sc-403232-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FBL10 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FBL10 Double Nickase Plasmid (h) e il FBL10 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KDM2B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FBL10 Antibody (5G1): sc-293279
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FBL10 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403232-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FBL10 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403232-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDM2B umano codifica la proteina FBL10, una demetilasi degli istoni con dominio JmjC e un fattore associato alla cromatina che collega il riconoscimento delle isole CpG alla regolazione trascrizionale. FBL10 partecipa al controllo epigenetico dell’espressione genica attraverso la demetilazione della lisina degli istoni e il coordinamento con meccanismi associati a Polycomb, influenzando l’accessibilità della cromatina e i programmi genici dello sviluppo. Modulando vie coinvolte nella progressione del ciclo cellulare, nella differenziazione e nel mantenimento dell’identità cellulare, l’attività di KDM2B/FBL10 contribuisce a plasmare stati trascrizionali specifici di linea. La disregolazione di KDM2B è stata segnalata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, tra cui la riprogrammazione trascrizionale oncogenica e fenotipi staminali alterati, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione epigenetica.
FBL10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KDM2B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KDM2B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KDM2B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KDM2B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.