FANCD2 Plasmide Double Nickase (m): sc-431756-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FANCD2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FANCD2 Double Nickase Plasmid (m) e il FANCD2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Fancd2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FANCD2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431756-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FANCD2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-431756-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Fancd2 codifica FANCD2, un effettore centrale della via di riparazione dei crosslink interfilamento del DNA dell’anemia di Fanconi (FA), che protegge la stabilità del genoma durante lo stress replicativo. In seguito a danno al DNA, FANCD2 viene monoubiquitinata insieme a FANCI e reclutata alle forcelle di replicazione bloccate, coordinando il processamento nucleolitico, la ricombinazione omologa e le interazioni con fattori di riparazione associati a BRCA. Questa attività sostiene il controllo del checkpoint della fase S, limita le rotture cromosomiche e preserva l’integrità delle forcelle di replicazione. L’alterazione della riparazione dipendente da FANCD2 è associata alla biologia dell’anemia di Fanconi e a un’ipersensibilità agli agenti che inducono crosslink, rendendo Fancd2 un locus chiave per studiare la riparazione del DNA accoppiata alla replicazione e il mantenimento del genoma in modelli murini.
FANCD2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Fancd2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Fancd2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Fancd2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Fancd2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.