FAM21C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404093-ACT

WASHC2C codifica a FAM21C, um componente do complexo WASH que coordena a polimerização de actina em endossomos para controlar a remodelação de membranas e a triagem de cargas. Por meio da regulação do tráfego associado ao retromer, a FAM21C ajuda a governar a reciclagem de receptores, o transporte de endossomos para o Golgi e a organização espacial de receptores de sinalização na superfície celular. Perturbações na atividade da via WASH podem remodelar a dinâmica do citoesqueleto, o roteamento vesicular e as redes de sinalização a jusante que influenciam proliferação, migração e diferenciação. Consequentemente, programas alterados de tráfego endossomal ligados à função do complexo WASH são relevantes para mecanismos estudados em biologia do câncer, neurobiologia e regulação de células imunes.

FAM21C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WASHC2C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAM21C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WASHC2C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WASHC2C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAM21C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WASHC2C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAM21C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAM21C em células tumorais com expressão de WASHC2C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.