FAM177A1 Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-417161-ACT-2

Il gene umano FAM177A1 (family with sequence similarity 177 member A1) codifica una proteina scarsamente caratterizzata, con collegamenti emergenti all’omeostasi cellulare e a processi biologici correlati al sistema immunitario sulla base di dati di espressione e di associazione genetica. Le evidenze attuali suggeriscono che FAM177A1 possa influenzare il traffico intracellulare e programmi di segnalazione che modellano le risposte infiammatorie, rendendolo rilevante per lo studio della regolazione dipendente dal contesto delle vie dell’immunità innata. Varianti o un’espressione alterata di FAM177A1 sono state riportate in associazione a fenotipi di malattie complesse, supportandone l’impiego come bersaglio nella genomica funzionale per indagare le interazioni gene–ambiente e le reti trascrizionali a valle. L’editing genetico di FAM177A1 in cellule umane consente studi meccanicistici della connettività tra vie di segnalazione, screening fenotipici e la validazione di elementi regolatori candidati che influenzano processi immunitari e di risposta allo stress.

FAM177A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FAM177A1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FAM177A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FAM177A1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FAM177A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FAM177A1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FAM177A1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FAM177A1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FAM177A1 nelle cellule tumorali con espressione di FAM177A1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.