Factor XII Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409611
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Factor XII Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Factor XII, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Factor XII Antibody (C-8): sc-376770
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Factor XII Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-409611 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
F12 codifica il Fattore della coagulazione XII, uno zimogeno di serin-proteasi che avvia la via di attivazione da contatto quando viene esposto a superfici cariche negativamente, innescando l’attivazione di FXI e propagando la coagulazione intrinseca. Il Fattore XII attivato (FXIIa) collega inoltre la coagulazione al sistema callicreina–chinine promuovendo l’attivazione del precallicreina e la generazione di bradichinina, mettendo in relazione l’emostasi con l’infiammazione e la permeabilità vascolare. Attraverso queste cascate, F12 contribuisce alla segnalazione tromboinfiammatoria e interseca le vie del complemento e dell’immunità innata. L’attività disregolata di FXII è oggetto di studio in contesti quali la biologia della trombosi, i meccanismi dell’angioedema e i disturbi vascolari infiammatori, rendendo F12 un nodo utile per l’analisi delle vie di segnalazione in modelli di sangue ed endotelio.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Factor XII (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene F12 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del F12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto F12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Factor XII.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di F12 per lo studio della segnalazione di Factor XII, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni F12 critici per la funzione di Factor XII
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di F12 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Factor XII CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Factor XII CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus F12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Factor XII Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Factor XII (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia F12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio F12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.