EYA2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403115-ACT

EYA2 codifica Eyes absent homolog 2, un coattivatore trascrizionale e una fosfatasi tirosinica della famiglia delle dealoalogenasi dell’acido haloacetico, che modula i programmi di espressione genica durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. EYA2 si integra con le reti regolatorie SIX/DACH e contribuisce a processi quali la specificazione del destino cellulare, la differenziazione e le risposte al danno del DNA attraverso una segnalazione dipendente dalla fosforilazione e il controllo trascrizionale. Un’espressione o un’attività deregolata di EYA2 è stata associata ad alterazioni della proliferazione, della migrazione e dei programmi epitelio-mesenchimali in molteplici contesti patologici, a supporto della sua rilevanza negli studi di oncologia e biologia dello sviluppo. In quanto regolatore nucleocitoplasmatico umano, EYA2 è spesso analizzato per il suo ruolo nella segnalazione da stress e nei circuiti trascrizionali specifici di linea cellulare.

EYA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di EYA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

EYA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus EYA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione EYA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di EYA2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus EYA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da EYA2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via EYA2 nelle cellule tumorali con espressione di EYA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.