EXOSC4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405751

Panoramica

EXOSC4 codifica un componente centrale del complesso esosoma dell’RNA, un’esorribonucleasi multisubunità 3′–5′ che governa la sorveglianza e il turnover dell’RNA nel nucleo e nel citoplasma. Supportando la processazione e la degradazione di diverse specie di RNA, inclusi rRNA, sn/snoRNA e trascritti aberranti o instabili, EXOSC4 contribuisce al controllo qualità dell’RNA, alla biogenesi dei ribosomi e al mantenimento dell’omeostasi del trascrittoma. La funzione dell’esosoma si interseca con la processazione co-trascrizionale dell’RNA, l’esportazione nucleare e le vie di degradazione dell’RNA che modellano i programmi di espressione genica. La disregolazione dei fattori associati all’esosoma è stata collegata ad alterazioni del metabolismo dell’RNA e delle risposte cellulari allo stress, rendendo EXOSC4 un nodo rilevante per studi meccanicistici dei difetti di processazione dell’RNA in contesti patologicamente rilevanti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EXOSC4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EXOSC4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EXOSC4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EXOSC4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EXOSC4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EXOSC4 per lo studio della segnalazione di EXOSC4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EXOSC4 critici per la funzione di EXOSC4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EXOSC4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EXOSC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EXOSC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EXOSC4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EXOSC4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EXOSC4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EXOSC4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EXOSC4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.