EVA1B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-412477-LAC

EVA1B (nota anche come TMEM166L) codifica una piccola proteina transmembrana associata al reticolo endoplasmatico, implicata nella regolazione dell’autofagia e dell’apoptosi, programmi cellulari che coordinano la proteostasi, l’adattamento allo stress e le decisioni di sopravvivenza. EVA1B è stata collegata al traffico di membrana e all’omeostasi degli organelli, processi che si intersecano con la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR) e con l’integrità mitocondriale. Un’alterata espressione di EVA1B è stata riportata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi fenotipi associati al cancro e firme trascrizionali legate a infiammazione o neurobiologia, a supporto del suo impiego come marcatore o modulatore in studi di via. Studiare EVA1B aiuta a chiarire come la morte cellulare sensibile allo stress e il flusso autofagico contribuiscano a cambiamenti dipendenti dal contesto nella fitness cellulare e nelle reti di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale EVA1B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di EVA1B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale EVA1B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione EVA1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di EVA1B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo EVA1B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.