Ero1-Lα Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424456-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ero1-Lα Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Ero1-Lα CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Ero1-Lα CRISPR Activation Plasmid (m) e dal Ero1-Lα CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Ero1l. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ero1-Lα Antibody (YW-8): sc-100805
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ero1-Lα Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-424456-ACT | 20 µg | $397.00 |
Il gene murino **Ero1l** codifica l’ossidoreduttina 1 alfa del reticolo endoplasmatico (Ero1-Lα), una flavoproteina del reticolo endoplasmatico che ri-ossida le isomerasi della proteina disolfuro per supportare la formazione di legami disolfuro durante il ripiegamento ossidativo delle proteine. Accoppiando l’ossidazione dei tioli al trasferimento di elettroni dipendente da FAD, Ero1-Lα contribuisce all’omeostasi redox del RE e si interseca con la risposta alle proteine non correttamente ripiegate (UPR), la degradazione associata al RE (ERAD) e la proteostasi della via secretoria. Un’attività alterata di Ero1-Lα può modificare lo stress ossidativo e la segnalazione dello stress da calcio/del RE, collegando la regolazione di Ero1l a contesti quali l’adattamento all’ipossia, l’infiammazione e le esigenze secretorie associate ai tumori. Queste proprietà rendono Ero1l un bersaglio utile per studiare la maturazione, controllata dal redox, di proteine secrete e di membrana e il rimodellamento, responsivo allo stress, della funzione del RE.
Ero1-Lα Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ero1l senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Ero1-Lα Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ero1l nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ero1l, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ero1-Lα. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ero1l nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ero1-Lα nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ero1-Lα nelle cellule tumorali con espressione di Ero1l silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.