ERCC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400630-NIC

ERCC1 codifica un’endonucleasi specifica per la struttura che forma un eterodimero con XPF (ERCC4) per eseguire l’incisione 5′ durante la riparazione per escissione di nucleotidi e per processare i crosslink interfilamento del DNA e gli intermedi di replicazione bloccati. Questo complesso opera in vie di mantenimento del genoma che risolvono lesioni che deformano la doppia elica e coordinano la riparazione con la replicazione, limitando così l’accumulo di danni al DNA e di aberrazioni cromosomiche. L’attività di ERCC1 è strettamente legata alle risposte cellulari ai fotoprodotti indotti dai raggi UV e a una gamma di addotti ingombranti, con effetti a valle sulla progressione del ciclo cellulare e sulla segnalazione dell’apoptosi. Una capacità di riparazione mediata da ERCC1 deregolata è stata associata a fenotipi di stabilità genomica alterata ed è frequentemente oggetto di indagine negli studi sulle reti di risposta al danno del DNA e sui processi mutazionali.

ERCC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ERCC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ERCC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ERCC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ERCC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.