EphB2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420199

Panoramica

Ephb2 codifica EphB2, un recettore tirosin-chinasico del sistema di segnalazione efrina–Eph che media una comunicazione dipendente dal contatto tra cellule vicine. In seguito al legame con ligandi efrina-B ancorati alla membrana, EphB2 innesca una segnalazione bidirezionale che regola il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione cellulare e la migrazione direzionale, con ruoli di primo piano nella guida assonale, nell’organizzazione delle sinapsi e nella formazione dei confini tissutali. Nei modelli murini, la segnalazione dipendente da EphB2 influenza l’assemblaggio dei circuiti neuronali e la patterning vascolare ed è stata associata a fenotipi che includono alterazioni nel posizionamento cellulare e nel comportamento invasivo. L’attività deregolata di EphB2 è spesso studiata nel contesto di difetti dello sviluppo e di vie legate al cancro che controllano motilità e compartimentalizzazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EphB2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ephb2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ephb2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ephb2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EphB2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ephb2 per lo studio della segnalazione di EphB2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ephb2 critici per la funzione di EphB2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ephb2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EphB2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EphB2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ephb2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EphB2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EphB2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ephb2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ephb2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.