EphA7 Plasmide Double Nickase (m): sc-420197-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EphA7 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EphA7 Double Nickase Plasmid (m) e il EphA7 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Epha7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EphA7 Antibody (E-7): sc-393973
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EphA7 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420197-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphA7 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420197-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Epha7 codifica EphA7, una tirosin-chinasi recettoriale della famiglia ephrin–Eph che media una segnalazione dipendente dal contatto per regolare il posizionamento cellulare, la formazione di confini e la guida assonale durante lo sviluppo. In seguito al legame con i ligandi ephrin, EphA7 attiva vie che coinvolgono le GTPasi della famiglia Rho, la segnalazione MAPK e il rimodellamento del citoscheletro, modulando programmi di migrazione e adesione. Nel sistema nervoso, EphA7 contribuisce all’assemblaggio dei circuiti neurali e all’organizzazione sinaptica, e alterazioni della segnalazione Eph/ephrin sono state associate a difetti nel patterning neuro-sviluppativo e a una disorganizzazione dell’architettura tissutale. Poiché i recettori Eph influenzano anche le decisioni di proliferazione e differenziamento, Epha7 è spesso studiato in contesti in cui la comunicazione cellula-cellula e l’organizzazione spaziale incidono su fenotipi rilevanti per la malattia.
EphA7 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Epha7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Epha7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Epha7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Epha7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.