ENT2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401952-NIC

SLC29A2 codifica il trasportatore equilibrativo dei nucleosidi 2 (ENT2), un trasportatore di membrana plasmatica ampiamente espresso che media un flusso bidirezionale, dipendente dalla concentrazione, di nucleosidi purinici e pirimidinici. ENT2 sostiene le vie di recupero dei nucleosidi che mantengono i pool di nucleotidi necessari per la sintesi di DNA/RNA e contribuisce alle risposte cellulari allo stress metabolico regolando la disponibilità di nucleosidi extracellulari e intracellulari. Modellando l’omeostasi dei nucleosidi, ENT2 si inserisce in processi quali la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress replicativo e la segnalazione dipendente dai nucleosidi in molti tessuti. Alterazioni dell’attività e dell’espressione di SLC29A2/ENT2 sono state investigate in contesti che includono la biologia tumorale, la funzione delle cellule immunitarie e la variabilità, legata ai trasportatori, della sensibilità cellulare agli analoghi dei nucleosidi, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici.

ENT2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC29A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC29A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC29A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC29A2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.