Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ENT2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401952-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ENT2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ENT2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ENT2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC29A2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ENT2: sc-373871
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ENT2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401952-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ENT2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401952-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC29A2 kodiert den equilibrativen Nukleosidtransporter 2 (ENT2), einen breit exprimierten Transporter der Plasmamembran, der einen bidirektionalen, konzentrationsabhängigen Transport von Purin- und Pyrimidin-Nukleosiden vermittelt. ENT2 unterstützt Nukleosid-Salvage-Wege, die die Nukleotidpools für die DNA-/RNA-Synthese aufrechterhalten, und trägt zu zellulären Antworten auf metabolischen Stress bei, indem er die Verfügbarkeit von Nukleosiden außerhalb und innerhalb der Zelle reguliert. Durch die Prägung der Nukleosidhomöostase ist ENT2 an Prozessen wie Zellzyklusprogression, Replikationsstressantworten und nukleosidabhängiger Signalübertragung in vielen Geweben beteiligt. Veränderte Aktivität und Expression von SLC29A2/ENT2 wurden u. a. im Kontext der Tumorbiologie, der Funktion von Immunzellen sowie transporterbedingter Unterschiede in der zellulären Empfindlichkeit gegenüber Nukleosidanaloga untersucht, was seine Relevanz für mechanistische Studien unterstreicht.
ENT2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC29A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC29A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC29A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC29A2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.