ENT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401603-NIC

Il gene umano SLC29A1 codifica il trasportatore equilibrativo dei nucleosidi 1 (ENT1), un trasportatore bidirezionale della membrana plasmatica che media l’ingresso e l’efflusso di nucleosidi purinici e pirimidinici in modo indipendente dal Na⁺. ENT1 contribuisce a regolare i pool intracellulari di nucleosidi che sostengono le vie di recupero (salvage) di purine/pirimidine, la sintesi di DNA/RNA e l’omeostasi energetica cellulare attraverso il trasporto dell’adenosina. Modulando la disponibilità di adenosina extracellulare, ENT1 influenza la segnalazione purinergica e le risposte a valle, come la modulazione dell’infiammazione e il tono vascolare. In letteratura, alterazioni dell’attività di SLC29A1 sono state collegate a fenotipi neurocomportamentali e a una disregolazione tessuto-specifica della segnalazione dell’adenosina, motivo per cui sono stati avviati studi meccanicistici in modelli cellulari neuronali, immunitari e di barriera.

ENT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC29A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC29A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC29A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC29A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.