EN2/Engrailed 2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403598-NIC

EN2 (Engrailed 2) è un fattore di trascrizione contenente un homeobox che regola la patterning spaziale e la differenziazione neuronale durante lo sviluppo umano, con ruoli di rilievo nella specificazione del confine mesencefalo–romboencefalo e nella formazione dei circuiti cerebellari. Legandosi al DNA tramite il suo homeodominio, EN2 coordina programmi di espressione genica che influenzano le decisioni sul destino cellulare, la guida assonale e l’organizzazione sinaptica. L’attività di EN2 si integra con reti di segnalazione dello sviluppo come WNT, FGF e SHH per affinare l’identità regionale e la tempistica della neurogenesi. Un’espressione deregolata di EN2 o un contesto regolatorio alterato è stata associata a fenotipi neuroevolutivi ed è frequentemente oggetto di studio nelle ricerche sulla specificazione delle linee neurali e sulla stabilità delle reti trascrizionali.

EN2/Engrailed 2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EN2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.