Embigin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408321-ACT

EMB umano codifica l’embigina, una glicoproteina transmembrana di tipo I appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, che funge da subunità accessoria dei trasportatori di monocarbossilati e modula le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice. Sostenendo il flusso di lattato e piruvato attraverso i complessi MCT, l’embigina contribuisce all’omeostasi metabolica, alla regolazione del pH e all’adattamento al microambiente nei tessuti in proliferazione. La biologia legata a EMB si interseca con vie che governano adesione, migrazione e utilizzo dei nutrienti, processi spesso riprogrammati nell’oncogenesi e negli stati infiammatori. Un’espressione deregolata dell’embigina è stata riportata in molteplici contesti associati a malattia, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sul rimodellamento metabolico e sull’invasività cellulare.

Embigin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di EMB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Embigin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus EMB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione EMB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Embigin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus EMB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Embigin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Embigin nelle cellule tumorali con espressione di EMB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.