Plásmido CRISPR de Activación (m) EGR1: sc-420133-ACT

La respuesta temprana al crecimiento 1 (Egr1) codifica el factor de transcripción con dedos de zinc EGR1, un gen de respuesta inmediata que se induce rápidamente por factores de crecimiento, señales de estrés y actividad neuronal. EGR1 regula programas que controlan la progresión del ciclo celular, la apoptosis, la diferenciación y la plasticidad sináptica al unirse a elementos promotores ricos en GC y coordinar respuestas de la cromatina y de la transcripción. En el ratón, EGR1 es un nodo clave aguas abajo de la señalización MAPK/ERK e integra entradas de vías dependientes de calcio y señales inflamatorias para moldear la expresión génica dependiente del estímulo. La actividad desregulada de EGR1 se ha implicado en contextos como la neuroadaptación, la activación inmunitaria, la remodelación asociada a la fibrosis y redes transcripcionales oncogénicas, lo que la hace útil para estudios mecanísticos del acoplamiento entre señalización y transcripción.

EGR1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Egr1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EGR1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Egr1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Egr1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EGR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Egr1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EGR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EGR1 en células tumorales con expresión de Egr1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.