ECH1 Plasmide Double Nickase (h): sc-406076-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ECH1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ECH1 Double Nickase Plasmid (h) e il ECH1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ECH1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ECH1 Antibody (B-3): sc-515270
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ECH1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406076-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ECH1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406076-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ECH1 (enoyl-CoA idratasi 1) è un enzima mitocondriale che catalizza le fasi di idratazione nella β-ossidazione degli acidi grassi e partecipa al metabolismo perossisomiale di acil-CoA insaturi e a catena ramificata. Regolando il flusso di acil-CoA e la produzione a valle di acetil-CoA, ECH1 collega il catabolismo lipidico alla bioenergetica cellulare, all’equilibrio redox e alle risposte allo stress metabolico. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di ECH1 sono state associate a una riprogrammazione metabolica in disturbi che coinvolgono la funzione mitocondriale e la gestione dei lipidi, ed ECH1 è spesso studiato nel contesto dello stress ossidativo e dei tessuti ad alta richiesta energetica. Queste caratteristiche rendono ECH1 un bersaglio utile per investigare le vie mitocondriali di ossidazione degli acidi grassi e il loro crosstalk con reti metaboliche più ampie.
ECH1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ECH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ECH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ECH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ECH1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.