EBF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401258-NIC

Early B-cell factor 1 (EBF1) è un fattore di trascrizione specifico per sequenza che programma l’impegno di linea e la differenziazione, con ruoli centrali nello sviluppo delle cellule B e nella regolazione di geni coinvolti nella segnalazione del recettore dell’antigene, nel controllo del ciclo cellulare e nell’accessibilità della cromatina. EBF1 coopera con altri regolatori ematopoietici per stabilire reti trascrizionali che governano la maturazione dei progenitori e il mantenimento dell’identità cellulare. Un’espressione o una funzione deregolata di EBF1 è stata associata ad alterazioni nella differenziazione delle cellule immunitarie ed è spesso studiata nel contesto della biologia delle neoplasie ematologiche e dello sviluppo del sistema immunitario. In quanto regolatore nucleare, EBF1 offre un punto di ingresso meccanicistico per analizzare il controllo enhancer–promoter e i circuiti trascrizionali in contesti sia linfoidi sia non linfoidi.

EBF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EBF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EBF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EBF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EBF1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.