Dynactin 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402369-NIC

DCTN1 codifica la dynactina 1, la principale subunità del complesso dynactina, che coopera con la dineina citoplasmatica per guidare il trasporto sui microtubuli diretto verso l’estremità meno. La dynactina 1 favorisce l’interazione con gli adattatori di carico, la motilità processiva e l’organizzazione del fuso mitotico, collegandosi così a vie che regolano il traffico vescicolare, il posizionamento di endosomi/lisosomi e il trasporto assonale nei neuroni. Attraverso ruoli nella funzione del centrosoma, nella dinamica autofagia–lisosoma e nella proteostasi, DCTN1 contribuisce a mantenere l’omeostasi cellulare nelle cellule altamente polarizzate. L’alterazione genetica di DCTN1 è stata associata a fenotipi neurodegenerativi, inclusi disturbi dei motoneuroni e del movimento, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul fallimento del trasporto e sulle risposte allo stress cellulare.

Dynactin 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DCTN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DCTN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DCTN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DCTN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.