dUTPase Plasmide Double Nickase (h): sc-405843-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- dUTPase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il dUTPase Double Nickase Plasmid (h) e il dUTPase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DUT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: dUTPase Antibody (H-9): sc-166856
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
dUTPase Plasmide Double Nickase (h) | sc-405843-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
dUTPase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405843-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DUT codifica la dUTPasi umana, un enzima del metabolismo nucleotidico che idrolizza il dUTP in dUMP, riducendo così i livelli intracellulari di dUTP e fornendo il substrato per la biosintesi del timidilato. Prevenendo l’incorporazione erronea di uracile nel DNA, la dUTPasi sostiene l’integrità del genoma durante la replicazione e la riparazione del DNA e contribuisce a limitare i cicli di riparazione per escissione di basi innescati dalle uracil-DNA glicosilasi. L’attività di DUT si integra con il metabolismo dei folati e delle unità a un carbonio e con l’omeostasi delle pirimidine, collegando l’equilibrio dei nucleotidi alle risposte allo stress replicativo. Un metabolismo del dUTP deregolato e l’accumulo di uracile sono associati a un aumento della segnalazione di danno al DNA e sono stati indagati in contesti di instabilità genomica e biologia tumorale.
dUTPase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DUT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DUT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DUT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DUT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.