DSCR 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402694

Panoramica

RCAN1 (DSCR1) codifica una proteina che interagisce con la calcineurina e funge da regolatore endogeno della segnalazione Ca2+-dipendente modulando l’attività fosfatasica della calcineurina. Attraverso questa interazione, DSCR1 influenza i programmi trascrizionali guidati da NFAT che regolano le risposte allo stress, la crescita e la differenziazione cellulare, e si interseca con le vie MAPK e dello stress ossidativo. L’espressione di RCAN1 è sensibile agli stressori cellulari e alla segnalazione delle citochine, collegandola a un controllo dinamico degli output trascrizionali in molteplici tessuti. Un’attività deregolata di RCAN1 è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e ad alterazioni della segnalazione vascolare e immunitaria, offrendo una chiave meccanicistica per studiare lo squilibrio delle vie di segnalazione in contesti rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DSCR 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RCAN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RCAN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RCAN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DSCR 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RCAN1 per lo studio della segnalazione di DSCR 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RCAN1 critici per la funzione di DSCR 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RCAN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DSCR 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DSCR 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RCAN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DSCR 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DSCR 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RCAN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RCAN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.